葡聚糖凝胶 LH-20使用说明
来源:    发布时间: 2017-12-06 09:11   60 次浏览   大小:  16px  14px  12px
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葡聚糖凝胶 LH-20使用说明
葡聚糖凝胶LH-20通过葡聚糖凝胶 G-25的羟丙基化制备,并且专门适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子,天然产物在有机溶剂中的纯化,例如类固醇,萜类化合物,脂质和低分子量肽。
流动相的常用溶剂为:水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
上述溶剂的极性依次降低,对带有极性的被分离物而言,保留值和分离度依次递增;同理选用的凝胶柱高可依次降低,流速可以增大(或上样量可以增加,树脂体积在低极性溶剂中明显收缩)。
溶剂的溶解性,极性,沸点,毒性都是要考虑到的,二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离采用,葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质,且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。 
 
项     目 指     标
排阻极限(与所用溶剂有关) 4-5KD
形状 球形,多孔
球蛋白分离范围 100-4000
粒径(干粉) 100-200目
最高流速 150 cm/h
工作温度 4~40 ℃
耐压 0.3MPa
pH值稳定性 2~13(短时间,在位清洗)
pH工作范围 2-13
化学稳定性 在大多数含水和有机洗脱液系统中稳定。在pH 2以下不稳定,对强氧化剂也不稳定。
1 使用方法
葡聚糖凝胶LH-20以干粉形式存在,使用前必须溶胀,在膨胀期间应避免过度搅拌,因为它可能破坏填料,不要使用磁力搅拌器,溶胀的程度将取决于所使用的溶剂体系,在室温条件下至少溶胀3个小时。
2填料的准备
(1)将溶胀好的填料,所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度。
3 装柱
(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
(2)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
(3)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(4)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
注意:上述装柱方法可用于葡聚糖凝胶LH-20在大多数溶剂中的填充。在一些溶剂中,例如氯仿,葡聚糖凝胶LH-20比溶剂密度小,并在其中漂浮,则需用其他方法。
4平衡
上样前平衡层析柱至少5-10个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止。
5 上样
样品一定要离心或过滤后(0.45um)上样。
样品体积应在总柱床体积的1-2%的范围内,视分离情况可以调整,柱高的选择也与分离要求相关,柱高过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制。
6洗脱
一般来说,流速越低,分辨率越好。
7 再生
通常通过用5-10倍柱体积的洗脱液洗涤柱,如果改变条件,需要用新的洗脱液重新进行平衡操作。
 
注意事项:
1.上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
2.在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行